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河北淀粉酶厂家

产品时间:2020-03-17

简要描述:

应用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、纺织、医药及石油开采等行业。由于该酶是一种有内切活性的淀粉酶,可在中性pH条件下将淀粉水解为糊精、寡糖、麦芽糖和葡萄糖等,从而使黏稠的淀粉糊很快失去黏性而液化,碘的呈色反应很快消失,故又称为淀粉液化酶。 河北淀粉酶厂家

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   淀粉酶

淀粉酶属于水解酶类,是催化淀粉、糖元和糊精中糖苷键的一类酶的统称。淀粉酶广泛分布于自然界,几乎所有植物、动物和微生物都含有淀粉酶。他是研究较多、生产最早、应用和产量的一种酶,其产量占整个酶制剂总产量的50 %以上。按其来源可分为细菌淀粉酶、霉菌淀和麦芽糖淀粉酶。根据对淀粉作用方式的不同,可以将淀粉酶分成四类:α- 淀粉酶,他从底物分子内部将糖苷键裂开:β- 淀粉酶,他从底物的非还原性末端将麦芽糖单位水解下来: 葡萄糖淀粉酶,他从底物的非还原性末端将葡萄糖单位水解下来:脱支酶,只对支链淀粉、糖原等分支点的α- 1,6- 糖苷键有专一性。其中α-淀粉酶以淀粉或糖原为底物,从分子内部水解α-1,4 -糖苷键,广泛存在于动物、植物和微生物中,应用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、纺织、医药及石油开采等行业。由于该酶是一种有内切活性的淀粉酶,可在中性pH条件下将淀粉水解为糊精、寡糖、麦芽糖和葡萄糖等,从而使黏稠的淀粉糊很快失去黏性而液化,碘的呈色反应很快消失,故又称为淀粉液化酶。β-淀粉酶是一种外切型糖化酶,作用于淀粉时,能从α-1,4糖苷键的非还原性末端顺次切下一个麦芽糖单位,生成麦芽糖及大分子的β-界限糊精。由于该酶作用底物时,发生沃尔登转位反应,使产物由α-型变为β-型麦芽糖,故名β-淀粉酶。其广泛存在于大麦、小麦、玉米、大豆、甘薯等植物和一些微生物

1.α-淀粉酶分离纯化方法的研究  河北淀粉酶厂家  河北淀粉酶厂家

高纯度α-淀粉酶是一种重要的水解淀粉类酶制剂,可用于研究酶反应机理和测定生化反应平衡常数等。分离纯化α-淀粉酶的方法很多,一般都是依据酶分子的大小、形状、电荷性质、溶解度、稳定性、专一性结合位点等性质建立的。要得到高纯度α-淀粉酶,往往需要将各种方法联合使用。盐析沉淀、凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水作用层析、亲和层析和电泳等,是蛋白质分离纯化的主要方法。通过乙醇沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析等方式,从白曲霉菌A.kawachii的米曲粗抽出液中,分离纯化到两个耐酸性α-淀粉酶比活性极高的组分。用疏水吸附法和DEAE-cellulose柱层析法分离纯化α-淀粉酶,所得酶活力为110 000 U/g。用硫酸铵沉淀和垂直板制备凝胶电泳对地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶进行分离纯化,得到3种电泳均一的组分。通过超滤、浓缩、脱盐和聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳,对利用基因工程菌生产的重组超耐热耐酸性α-淀粉酶进行纯化,得到电泳纯级的超耐热耐酸性α-淀粉酶,纯化倍数为11.7,活力回收率29.8% 。

但上述方法存在的共同问题是,连续操作和规模放大都比较困难。反胶团萃取具有选择性高、正萃与反萃可同时进行、分离与浓缩同步进行、操作简单和易于放大等优点,并能有效防止生物分子变性失用DMBAC(十二烷基二甲基苄基氯化铵)/正庚反胶团体系萃取分离纯化α-淀粉酶,克服了以前的AOT(丁二酸-2 -乙基己基酯磺酸钠)/异辛烷体系无法对分子量大于30000的酶进行有效萃取分离的缺点,并对萃取工艺条件进行优化,易于实现各种酶分离,单级萃取率高,总回收率可达78.0%,但对连续萃取及有关工艺条件的完善有待进一步研究。双水相技术具有处理容量大、能耗低、易连续化操作和工程放大等优点。应用双水相系统PEG/磷酸盐分离纯化α-淀粉酶,增PEG浓度有助于酶富集上相。同样用PEG/磷酸盐双水相体系从发酵液中直接萃取分离低温α-淀粉酶,分配系数及回收率分别为4.8 和87%。

采用PEG/硫酸铵双水相体系,进行分离纯化α-淀粉酶,结果表明,在室温下由PEG和硫酸铵所组成的双水相体系,对α-淀粉酶的回收率可达94.84%,分配系数可达17.10。双水相技术有着溶液粘度高、分相时间长,易造成界面乳化等缺点,给实际操作带来很多问题。PVP和硫酸铵对酶活力具有保护作用,利用PVP/硫酸铵液-固萃取体系分离提取耐高温α-淀粉酶,酶活力回收率高,体系成相时间短,操作时需双水相体系所用的分液漏斗和离心操作,用倾液法即可实现相分离,因此,与双水相体系相比,液-固取体系具有更大的优越性。高效液相色谱属于硬基质色谱,比软基质色谱分离速度快,效率高,分辨率高,用强阴离子高效液相色谱分离纯化工业α-淀粉酶可获得较高的重复性和回收率,既可用于工业α-淀粉酶纯化,也可用于其他来源的α-淀粉酶纯化。

2. β-淀粉酶的纯化

与一般蛋白质纯化方法相同,β-淀粉酶的纯化一般经过(NH4)2SO4 盐析、凝胶过滤或离子交换除盐等步骤,有时也采用海藻酸钠将酶沉淀。在粗提液中,常含有一些可溶性糖和无机盐,也存在一些杂蛋白或其他酶系,为了获得较纯净的酶,通常要根据提取酶的特性确定纯化方法。如采用加热、调pH值、添加蛋白质沉淀剂,使杂蛋白失活,再进一步配合过滤、离心等手段以纯化酶。

 

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